八宝眼药对外伤性角膜混浊作用的实验研究

角膜溷浊是多种原因所引起的常见症状,在瞳孔域则影响视力,严重者可致失明,属中医“骄”的范畴。为了继承与发扬祖国医学道产,我们依据中医外用退翳法治疗黑睛翳障的原则,按照全国角膜瘢痕协作规定的要求,运用八宝眼药,对家兔外伤性角膜溷浊模型进行了实验研究,现将情况总结报导如下。材料与方法/.动物模型的建立:选月龄8~10月体重1·5公斤左右的白色大耳短毛家兔66只,雌雄各半,右眼结膜堂冲洗消毒,1·5%地卡因液表面麻醉后,用2·5m角膜环钻在角中央钻切至质前层(深0·3m)并作圈内角膜非穿透性切除,用标签沾25%硫映挂触创面1秒,使之形成烧伤而溷浊,术后用抗菌素眼液冲洗创面,并每日以0·4%庆大霉素溶液滴眼2次,0·5%红霉素眼青涂眼2次持续10天,以防感染。2八宝眼药的制备:选用优质大珠,熊胆、炉甘石等八味中药经特殊精细加工,按一定比例调配,过200目筛分装,置于干燥处贮存。3.方法:检查造型10天后的家兔模型,淘汰角膜感染者,将剩余家兔模型随机分为甲乙两大组。甲组为点药组,每日以八宝眼药涂眼一次,乙组为对照组,每日用生理盐水点眼一次。在试验第二个月时,各组淘汰部分病、死兔后,无选择的由两组各抽出5只作为甲1组和乙1组,摘出右眼;四个月时用同样方法再各抽5只作为甲乙组,乙2组摘出右眼;六个月时亦各抽出5只作为甲3组,乙3组,摘出右眼,分别作病理切片镜检。实际观察数为30只。结果一、活体观察:点药前家兔右眼角膜形成的4·5mm直径园形溷.浊,境界模煳,中心凹陷2·5nm直径,深0·3m(见照片1、2)。1.试验第二个月时:甲组角膜较乙组光滑,溷浊范围略小于乙组。2试验第四个月时:甲组角膜表面光滑,溷浊不规则缩小平均约至2·5m直径,明显变薄,境界清楚,乙组角膜表面有8只已光滑,溷浊范围亦不规则缩小约至3·0mm直径,厚度变薄,有4只界限欠清·3.试验第六个月时:甲乙两组角膜表面均光滑,角膜溷浊缩小,变薄,甲组溷浊范围略小于乙组(见照片3、4)讨论一、对角膜溷浊的认识:黑晴失去透明而变溷浊的病患,中医称为“翳”,由于病理基础,具体症状不同,相应有很多分类方法1〕。湖南李传课同志则将其归纳为动、静两类。动翳包括凝脂翳,花翳白陷,聚星障,溷清障等,一般多由风热、火毒所引起,静翳包括冰瑕翳,云翳,宿翳,钉翳等等〔2),多由动翳失活转化而成。从西医组织学角度看,根据Maurice提出的“格子理论”,(LatiticeJhcory)(③角膜胶元纤维的直径很相等,而且排列成格状,同时纤维的间隔距离小于1光波长,这种纤维格状网对所散射光线起衍射栅栏作用,产生破坏性干扰,反而互相加强使组织显得透明〔④,因此,角膜炎症期的细胞浸润、组织水肿溃疡(相当于中医的动翳),与角膜瘢痕的角膜纤维结缔组织异常增生,胶元纤维粗细不等,组织排列紊乱(相当于中医的静翳)(5均能破坏这种结构的均一性,造成角膜透明性的丧失(6’形成角膜溷浊,即中医的“翳”。我们运用机械伤与化学伤二者结合造成的角膜溷浊,试验半年时间,据病理检验,包括了组织缺损,炎性浸润及后期的瘢痕形成,横跨了动、静翳两个阶段,符合模型设计的要求。二、药物、试验法的选择八宝眼药配方各地不一,我们采用某老中医祖传之方,其中主要药物多是甘咸苦寒之品,苦寒可清热泄火,咸寒可软坚化痰,其中更有炉甘石等收涩之品,可以收涩疮,全方组合具有清热。消痰,收敛.退弱之功。此外,方中熊胆在甘南地区民间早就用来治疗角膜翳。其方中应用了珍珠,据西王淑秀报导,应用珍珠层粉治疗角膜瘢痕,取得一定的效果,认为药物中的Ca+激活了胶元酶,促使增生过量的胶原纤维分解,药物中的氨基酸及金属元素改善了角膜的营养,促使排列紊乱了的纤维恢复了正常的纤维格状网排列状态,从而导致角膜恢复透明性(7)·所以,我们选用了此方进行试验,同时,为了确实把握八宝眼药对动、静翳不同效应及作用原理,我们采用了甲乙对照阶段分组,分期取样的试验方法。三、对试验结果的认识:通过试验对比,可以看出:甲乙两组有明显差异,下面以角膜组织解剖层次分别进行讨论。1.上皮层:甲组第二个月上皮即恢复,而乙组第二个月仍呈溃疡,六个月尚有一例未完全恢复,两组修复时间差异明显,证明八宝眼药对家免角膜上皮的修复,溃疡的愈合,有明显的促进作用。一般认为:兔眼局部抵抗力与角膜上皮修复力均较强〔8,上皮剥落后,新生上皮多在一周内附着。但根据Khodadoust 及其同事的研究,在家兔身上,新生上皮的粘附要依靠其底的基底膜的存在,当基底膜被去除时,该处的新生上皮就不能牢固地附着,直到新生基底膜出现,新生上皮才能与之粘附。在兔子角膜,这种恢复需几个星期〔9)’所以易豪林所作家兔角膜中度殓灼伤溃疡31天自然愈合(10)’朱有章每所作人工外伤接种细菌造成兔角膜溃疡26~37天自然愈合。(11)而此次试验乙组上皮两月时尚未恢复,明显长于上述两人所总结的恢复时间,可能是由于采用角膜部分切除加酸性灼伤造成的损伤较重,溃疡较深,致使前基膜恢复困难,而上皮修复时间延长。2前弹力层:甲组二个月时前弹力层部位出现细胞核,四个月时,开始形成,六个月完全恢复,乙组至六个月时,前弹力层均未出现而消失,对前弹力层,一般认为损伤后是不能再生的,但甲组结果却相反,对此,我们认为,前弹力层在电镜下可见为与表面平行的胶元纤继和浓缩的细胞间质组成,是由角膜实质表层演变而成,其与实质层主要为纤维排列结构不同,由于八宝眼药具有促使纤维排列有序的作用,在实质层纤维恢复整齐的同时,前弹力层的纤维是否亦以原有的结构有序排列,从而得到了恢复,对此,我们想再做进一步的电镜观察。3.实质层:甲组第二个月时,实质层纤维排列紊乱,尚有炎性没润,四个月时,炎性浸润消失,纤维排列部分有序,与活体观察角膜溷浊明显缩小变薄相符,六个月时除一例外,纤维均排列整齐。乙组两个月时尚有溃疡,四个月时纤维排列紊乱,3例仍有炎性漫润,六个月时浸润消失,而纤维排列均呈紊乱状。两组纤维排列有明显差异。我们推论,八宝眼药在局部应用,可能具有抑制亢进的纤维母细胞,胶元的合成作用,亦可能同时具有促进胶元分解的作用,从而抑制了胶元纤维的过量增生,并促进排列紊乱的纤维恢复为有序状态。从理论上讲,角膜实质纤维排列有序,角膜溷浊应相应消退,六个月时活体观察,甲乙两组溷浊的大小差别却不明显,是否应考虑角膜基质中酸性粘多糖,含水量等方面的因素,及其它超微结构变化的影响,有待应用电镜进一步观察。以乙组四个月后的活体观察所见,在角膜瘢痕形成后,家兔角膜溷浊仍有自然变薄的情况,据日本相滴清治认为,小儿角膜瘢痕有自然消退的可能’〔12)’是否12个月左右的家兔亦具这种可能,对此问题,6个月观察尚嫌时短,应进一步作较长时间的追踪观察。4.角膜后部:从模型受试前到全部受试期,实质层后部后弹力层及内皮层均未受影响而保持完好,证明酸性烧伤对家免角膜组织的损伤比较局限。另从甲组用药两个月后的角膜切片中,均未发现药物颖粒的残留。四、关于动物模型制作应注意的几个问题:/.最好选择月龄较大的家兔。我们曾选用3~4月龄的家兔30只作过试验,结果由于抵抗力差,角膜感染率、患病率、死亡率均偏高,最后全部淘汰。。2避开传染季节准备好预防药物·家兔传染性疾病多有季节性,如危害较大的球虫病常发生在阴雨季节,对这种试验长达半年的模型影响极大,故在试验时机的选择上应有充分思想准备,最好避开或事先有所准备。应备好各种预防治疗药物,一有传染苗头及时用药防治。3.留有较充足的淘汰数量,由于试验期长,各种意外情况都可能发生,模型淘汰率比例也相对较高,如不留有充分的余地,很可能导致试验半途而废,故我们采用了淘汰率>55%的比例数量。4.注意抗感染药物的选择。在初次试验时,我们应用氯霉素眼液和四环素眼膏,角膜感染控制不理想,后根据临床经验,我们改用了0·4%的庆大霉素液和红霉素眼膏,感染率明显下降。5.溃疡模型建立时,要作环钻圈内非穿透性切除,我们曾用环钻作环切后,不切除中心组织,结果模型建立不理想。小结本文根据中医退翳明目法则,选用八宝眼药对家兔外伤加酸性烧伤后非感染性角膜溷浊进行了实验研究,经阶段病理检查,证明八宝眼药能促进角膜溃疡的修复,有抑制炎症浸润的作用,并能促进角膜上皮的修复及实质紊乱纤维排列有序,从中医辩证施治角度,结合西医组织学分析,讨论了角膜溷浊的原理和治疗用药的机理,并根据试验的结果与教训提出了一些疑点与今后探索途径及模型建立的几点注意事项。